{"id":262,"date":"2012-02-22T17:03:49","date_gmt":"2012-02-22T17:03:49","guid":{"rendered":"http:\/\/perficadev.com\/alethia\/trunk\/?page_id=262"},"modified":"2013-01-15T12:42:04","modified_gmt":"2013-01-15T17:42:04","slug":"decouvertes","status":"publish","type":"page","link":"https:\/\/alethiabio.com\/fr\/recherche-et-developpement\/decouvertes\/","title":{"rendered":"Plateforme de d\u00e9couverte"},"content":{"rendered":"

Amplification soustractive d\u2019ARNm bas\u00e9e sur la transcription (STAR)<\/h1>\n

Alethia cherche \u00e0 d\u00e9couvrir des g\u00e8nes li\u00e9s \u00e0 des maladies et \u00e0 valider leur utilisation comme cibles dans le d\u00e9veloppement de produits th\u00e9rapeutiques. Tout changement dans l\u2019\u00e9tat d\u2019une cellule, tel que ceux qui se produisent dans un \u00e9tat pathologique ou durant un traitement m\u00e9dicamenteux, est provoqu\u00e9 par des alt\u00e9rations de l\u2019activit\u00e9 de divers g\u00e8nes dans la cellule, entra\u00eenant la modification de l\u2019expression de certains ARNm. Les diff\u00e9rences d\u2019activit\u00e9 g\u00e9n\u00e9tique entre deux cellules ou plus, mesur\u00e9es par les ARNm exprim\u00e9s, constituent ce que l\u2019on appelle l\u2019expression diff\u00e9rentielle.<\/p>\n

Une cellule humaine typique exprime environ 20 \u00e0 30 % des g\u00e8nes du g\u00e9nome humain sous la forme d\u2019ARNm distincts, dont pr\u00e8s de la totalit\u00e9 (99 %) sont tr\u00e8s peu abondants. Bien que ces ARNm rares repr\u00e9sentent chacun moins de 0,005 % de l\u2019ensemble, collectivement, ils constituent environ la moiti\u00e9 de tous les ARNm d\u2019une cellule typique. Les diff\u00e9rences fonctionnelles et morphologiques entre les types cellulaires sont dues \u00e0 l\u2019expression diff\u00e9rentielle des g\u00e8nes dans des cellules ayant le m\u00eame g\u00e9nome. En raison de ces complexit\u00e9s, la mise en \u00e9vidence des s\u00e9quences d\u2019ARNm diff\u00e9rentiellement exprim\u00e9es dans deux types cellulaires ou plus peut s\u2019av\u00e9rer terriblement ardue.<\/p>\n

Alethia a reconnu la n\u00e9cessit\u00e9 de nouvelles techniques permettant de r\u00e9duire la complexit\u00e9 des ARNm cellulaires \u00e0 un nombre raisonnable de s\u00e9quences diff\u00e9rentiellement exprim\u00e9es et de produire des banques de s\u00e9quences simplifi\u00e9es directement utilisables pour la validation.<\/p>\n

Technique de d\u00e9couverte STAR<\/h2>\n

En accord avec cette mission, Alethia exploite une technique d\u2019amplification soustractive d\u2019ARNm bas\u00e9e sur la transcription appel\u00e9e STAR (Subtractive Transcription-based Amplification of mRNA) pour la d\u00e9couverte de s\u00e9quences d\u2019ARNm exprim\u00e9es diff\u00e9rentiellement, y compris les plus rares. Les ARNm de chaque \u00e9chantillon cellulaire sont utilis\u00e9s pour la pr\u00e9paration de banques d\u2019ADNc, \u00e0 partir desquelles des ARN simple brin (+) sens cibles et des ADN simple brin (-) antisens entra\u00eeneurs peuvent \u00eatre synth\u00e9tis\u00e9s. L\u2019ARN cible contient des s\u00e9quences terminales permettant l\u2019amplification dans un processus d\u2019amplification d\u2019ARN. La technique STAR amplifie pr\u00e9f\u00e9rentiellement les s\u00e9quences qui sont pr\u00e9sentes dans l\u2019ARN cible et absentes ou moins abondantes dans l\u2019ADN entra\u00eeneur par une combinaison d\u2019hybridation soustractive et d\u2019amplification d\u2019ARN.<\/p>\n

\"\"<\/a><\/p>\n

La technique STAR se d\u00e9marque par sa capacit\u00e9 \u00e0 mettre en \u00e9vidence des s\u00e9quences diff\u00e9rentiellement exprim\u00e9es d\u2019une mani\u00e8re distincte des m\u00e9thodes ant\u00e9rieures. Contrairement aux autres approches soustractives, qui n\u00e9cessitent la r\u00e9hybridation d\u2019un ADN double brin pour l\u2019amplification par PCR, la technique STAR utilise l\u2019ADN d\u2019une banque pour inactiver l\u2019ARN simple brin d\u2019une autre banque, ce qui permet l\u2019amplification lin\u00e9aire des ARN exprim\u00e9s diff\u00e9rentiellement qui restent. C\u2019est ce changement de paradigme de l\u2019approche soustractive qui permet la pr\u00e9servation et la d\u00e9tection subs\u00e9quente des s\u00e9quences rares exprim\u00e9es diff\u00e9rentiellement.<\/p>\n

La technique STAR se distingue des autres m\u00e9thodes commerciales utilis\u00e9es pour l\u2019analyse de l\u2019expression diff\u00e9rentielle par son recours \u00e0 une \u00e9tape d\u2019amplification d\u2019ARN dont la cin\u00e9tique est lin\u00e9aire plut\u00f4t qu\u2019\u00e0 une amplification d\u2019ADN ayant une cin\u00e9tique exponentielle. Ceci r\u00e9duit l\u2019amplification pr\u00e9f\u00e9rentielle de certaines s\u00e9quences dans un m\u00e9lange, un ph\u00e9nom\u00e8ne que l\u2019on observe avec les techniques bas\u00e9es sur la PCR. En outre, l\u2019amplification bas\u00e9e sur la transcription est reconnue pour \u00eatre la moins sujette \u00e0 des distorsions dans la pr\u00e9paration de sondes pour l\u2019analyse de l\u2019expression des ARNm avec des puces \u00e0 ADN.<\/p>\n

La technique STAR \u00e9tant une m\u00e9thode pr\u00e9parative, elle poss\u00e8de des avantages distinctifs par rapport aux diverses versions commerciales d\u2019\u00e9tudes de l\u2019expression qui sont g\u00e9n\u00e9ralement utilis\u00e9es \u00e0 des fins analytiques. Les changements survenant dans le mod\u00e8le de la maladie entra\u00eenent une expression diff\u00e9rentielle qui est refl\u00e9t\u00e9e dans les produits obtenus au moyen de la technique STAR. Par cons\u00e9quent, alors que d\u2019autres m\u00e9thodes ne procurent que des donn\u00e9es sur l\u2019expression, la technique STAR produit du mat\u00e9riel informatif, qui peut \u00eatre utilis\u00e9 directement pour la validation de nouvelles cibles th\u00e9rapeutiques.<\/p>","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

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